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細(xì)胞壁不溶性酸性轉(zhuǎn)化酶（B-AI）檢測試劑盒（微量法 100T/48S）
| 貨號 | SH0311 | 售價（元） | 1260 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0311 |
細(xì)胞壁不溶性酸性轉(zhuǎn)化酶（B-AI）檢測試劑盒說明書（微量法 100T/48S） |
100管/48樣 |
測定意義：
蔗糖轉(zhuǎn)化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據(jù)最適 pH，Ivr分為酸性轉(zhuǎn)化酶（AI）和中性轉(zhuǎn)化酶（NI）兩種類型。
AI的最適pH為3～5。AI分為可溶性AI(S-AI)和細(xì)胞壁不溶性AI（B-AI）兩種類型。B-AI存在于細(xì)胞間隙并結(jié)合在細(xì)胞壁上，主要參與韌皮部質(zhì)外體卸載時蔗糖的分解，以維持庫源之間蔗糖的濃度。
測定原理：
定原理：
B-AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與B-AI活性成正比。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0311-100T/48S |
Storage |
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提取液1：液體 |
100ml |
4℃ |
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提取液2：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
20ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：液體 |
15ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入10ml試劑一充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存;
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
按照組織質(zhì)量（g）：提取液1體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液1），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min，棄上清，沉淀中加入1ml蒸餾水，充分震蕩混勻，12000g 4℃離心10min，棄上清，沉淀中加入1ml提取液2 充分混勻，4℃浸提過夜，12000g 4℃離心20min，取上清置冰上待測。
測定步驟和加樣表：
1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至510nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定，（在EP管中依次加入下列試劑）：
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試劑名稱（μl） |
測定管 |
對照管 |
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樣本 |
50 |
50 |
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試劑一 |
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200 |
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試劑二 |
200 |
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混勻， 37℃準(zhǔn)確水浴30min后，95℃水浴10min（蓋緊，以防水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）
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試劑三 |
125 |
125 |
混勻，95℃水浴10min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻，取200μl至微量石英比色皿或96孔板中， 510nm處記錄各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸餾水稀釋后測定(計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù))，ΔA=A測定-A對照。每個測定管設(shè)一個對照管。
B-AI活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y為吸光值。
（1）按蛋白濃度計算：
單位的定義：37℃每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個酶活性單位。
B-AI活性（μg /min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
（2）按鮮重計算：
單位的定義：37℃每g組織每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個酶活性單位。
B-AI活性（μg /min /g鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05ml；V2：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時間，30min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y為吸光值。
（1）按蛋白濃度計算：
單位的定義：37℃每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個酶活性單位。
B-AI活性（μg /min /mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr
（2）按鮮重計算：
單位的定義：37℃每g組織每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個酶活性單位。
B-AI活性（μg /min /g鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =41.6×(ΔA +0.001) ÷W
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05ml；V2：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時間，30min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。