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中性轉(zhuǎn)化酶(NI)檢測試劑盒(微量法100T/48S)

貨號 SH0309 售價(元) 1260
規(guī)格 100T/48S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

SH0309

中性轉(zhuǎn)化酶(NI)檢測試劑盒(微量法100T/48S)

100管/48樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義:

蔗糖轉(zhuǎn)化酶(InvertaseIvr)催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據(jù)最適 pH,將高等植物Ivr分為酸性轉(zhuǎn)化酶(AI)和中性轉(zhuǎn)化酶(NI)兩種類型。                           

NI主要存在于細胞質(zhì)中,負責分解細胞質(zhì)中蔗糖為果糖和葡萄糖。

測定原理:

NI催化蔗糖分解產(chǎn)生還原糖,進一步與3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內(nèi)510nm光吸收值與還原糖生成量成正比。通過光吸收增加速率來計算NI活性

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0309-100T/48S

Storage

提取液:液體

100ml

4℃

試劑一:液體

20ml

4℃

試劑二:粉劑

1

4℃

試劑三:液體

15ml

4℃

說明書

一份

試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入10ml試劑一充分溶解備用;用不完的試劑4℃保存;

自備儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

測定步驟和加樣表:

1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至510nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定,(在EP管中依次加入下列試劑):

試劑名稱(μl

測定管

對照管

樣本

50

50

試劑一

 

200

試劑二

200

 

混勻, 37℃準確水浴30min后,95℃水浴10min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻(以保證濃度不變)

試劑三     

125

125

混勻,95℃水浴10min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻,取200μl至微量石英比色皿或96孔板中, 510nm處記錄各管吸光值A,如果吸光值大于2,可以用蒸餾水稀釋后測定(計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)),ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設一個對照管。

NI活性計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001;x為標準品濃度(μg/ml),y為吸光值。

1)按蛋白濃度計算:

單位的定義:37℃mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個酶活性單位。

NI活性(μg/min /mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr

2)按鮮重計算:

單位的定義:37℃g組織每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個酶活性單位。

NI活性(μg/min /g 鮮重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W 

V1:加入反應體系中樣本體積,0.05mlV2:加入提取液體積,1ml;T:反應時間,30minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本鮮重,g。

b.96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001x為標準品濃度(μg/ml),y為吸光值。

1)按蛋白濃度計算:

單位的定義:37℃mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個酶活性單位。

NI活性(μg/min /mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr

2)按鮮重計算:

單位的定義:37℃g組織每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個酶活性單位。

NI活性(μg/min /g 鮮重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =41.6×(ΔA +0.001) ÷W 

V1:加入反應體系中樣本體積,0.05ml;V2:加入提取液體積,1ml;T:反應時間,30minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本鮮重,g。

 

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