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谷氨酰胺合成酶檢測試劑盒 (微量法100T/48S)
| 貨號 | SH0146 | 售價(jià)（元） | 672 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0146 |
谷氨酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）試劑盒 (微量法100T/48S) |
100管/48樣 |
測定意義：
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲存和運(yùn)輸形式。
測定原理：
GS在ATP和Mg2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為γ─谷氨?；惲u肟酸，在酸性條件下形成的絡(luò)合物在540nm處有最大吸收峰，可用分光光度計(jì)測定。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0146-100T/48S |
Storage |
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提取液 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
10ml |
-20℃ |
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試劑二：液體 |
10ml |
-20℃ |
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試劑三：粉劑 |
2瓶 |
-20℃ |
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試劑四：液體 |
15ml |
4℃ |
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說明書 |
1份 |
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試劑一臨用前37℃預(yù)熱20min，充分混勻，如有沉淀，靜置10min，取上清待用。
試劑二臨用前37℃預(yù)熱20min，充分混勻，如有沉淀，靜置10min，取上清待用。
試劑三用時(shí)每瓶加入5ml蒸餾水充分溶解待用。
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本測定的準(zhǔn)備：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、在EP管中加入下列試劑：
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試劑名稱（μl） |
測定管 |
對照管 |
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試劑一 |
160 |
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試劑二 |
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160 |
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試劑三 |
70 |
70 |
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樣本 |
70 |
70 |
混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）準(zhǔn)確水浴30min
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試劑四 |
100 |
100 |
混勻，25℃室溫靜置10min后，8000g，25℃離心10min，取200μl上清液至微量石英比色皿或96孔板中，測定540nm處的吸光值A?！?/span>A=A測定管-A對照管。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對照管。
GS活力單位的計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.8348x + 0.0008，R2 = 0.9999
1、血清（漿）GS活性
單位定義：每ml血清（漿）在每ml反應(yīng)體系中每小時(shí)產(chǎn)生1μmol γ-谷氨酰基異羥肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。
計(jì)算公式：
GS（μmol/h/ml）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷V樣÷T
=10.268×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞GS活性
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白在每ml反應(yīng)體系中每小時(shí)產(chǎn)生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。
GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
=10.268×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織在每ml反應(yīng)體系中每小時(shí)產(chǎn)生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。
GS（μmol/h/g 鮮重）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=10.268×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每ml反應(yīng)體系中每小時(shí)產(chǎn)生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。
GS（μmol/h//104 cell）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.021×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.3ml； V樣：加入樣本體積，0.07ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.4174x + 0.0008，R2 = 0.9999
1、血清（漿）GS活性
單位定義：每ml血清（漿）在每ml反應(yīng)體系中每小時(shí)產(chǎn)生1μmol γ-谷氨酰基異羥肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。
計(jì)算公式：
GS（μmol/h/ml）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反總÷V樣÷T
=20.535×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞GS活性
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白在每ml反應(yīng)體系中每小時(shí)產(chǎn)生1μmol γ-谷氨酰基異羥肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。
GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
=20.535×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織在每ml反應(yīng)體系中每小時(shí)產(chǎn)生1μmol γ-谷氨酰基異羥肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。
GS（μmol/h/g 鮮重）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=20.535×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每ml反應(yīng)體系中每小時(shí)產(chǎn)生1μmol γ-谷氨酰基異羥肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。
GS（μmol/h/104 cell）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.041×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.3ml； V樣：加入樣本體積，0.07ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。