新冠疫情尚未褪去，猴痘病毒又接踵而至。隨著不同應(yīng)用場景病毒檢測的需要，CRISPR分子診斷技術(shù)因其可與PCR、LAMP及RPA/RAA等多種核酸擴(kuò)增手段高效對接，并具有病原物快速、準(zhǔn)確鑒定的優(yōu)勢，在傳染病的即時檢測技術(shù)中迅速崛起，并成為科研及IVD行業(yè)中蓬勃發(fā)展的方向之一。
目前市場上廣泛商業(yè)化的CRISPR核酸檢測試紙條僅能顯示單一報告分子的切割產(chǎn)物，因此雖然科研領(lǐng)域已經(jīng)形成大量重磅級別的研究成果，但仍然難以滿足IVD行業(yè)對同一樣品雙靶標(biāo)陽性的檢測需求，因而未能得到廣泛應(yīng)用。
Tiosbio聚焦體外診斷核酸檢測試紙條產(chǎn)品的“科技創(chuàng)新+先進(jìn)制造”，重磅推出了兩款基于CRISPR Cas的雙靶標(biāo)核酸檢測試紙條新品：
1. 擴(kuò)增產(chǎn)物及Cas酶切產(chǎn)物檢測試紙條（JY0307）
JY0307適用于IVD病原物快檢試劑盒。內(nèi)參基因的質(zhì)控通過雙鏈擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測線T2顯示，監(jiān)控檢測流程中核酸釋放、擴(kuò)增步驟是否正常工作；CRISPR信號探針切割產(chǎn)物的檢測線T1對標(biāo)靶基因的信號放大過程，確保了靶基因高特異性和高靈敏度的檢測。
當(dāng)CRISPR信號探針（檢測線T1）、雙鏈擴(kuò)增產(chǎn)物（檢測線T2）做如下修飾時，即可使用JY0307進(jìn)行檢測——CRISPR信號探針的一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM）；擴(kuò)增產(chǎn)物一端修飾有地高辛（Dig），另一端修飾有羅丹明（TAMRA）。
JY0307不同檢測線和質(zhì)控線的顯色結(jié)果含義如下圖所示。
2. Cas12/Cas13雙酶切產(chǎn)物檢測試紙條（JY0308）
JY0308適用于雙鏈產(chǎn)物在同一體系進(jìn)行Cas12和Cas13雙酶切后的產(chǎn)物檢測。當(dāng)靶基因經(jīng)PCR、LAMP、RPA/RAA擴(kuò)增后，在同一體系內(nèi)，使用Cas12和Cas13酶同時對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行切割，Cas12酶對應(yīng)的DNA信號探針A（Cas12切割），與Cas13酶對應(yīng)的RNA信號探針B（Cas13切割）進(jìn)行如下修飾，即可使用JY0308進(jìn)行切割產(chǎn)物的檢測——其中，DNA信號探針A一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM），RNA信號探針B一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有地高辛（Dig）；或DNA信號探針A一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有地高辛（Dig），RNA信號探針B一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM）。
JY0308的特別之處在于，該產(chǎn)品為變色雙矯正顯色試紙條。當(dāng)DNA信號探針A和RNA信號探針B均發(fā)生酶切反應(yīng)，但酶切反應(yīng)不完全的情況下，質(zhì)控線C、檢測線T1和檢測線T2均會顯色，其中質(zhì)控線C為紫色，檢測線T1為紅色，檢測線T2為藍(lán)色；當(dāng)DNA信號探針A和RNA信號探針B完全酶切的情況下，只有檢測線T1和檢測線T2顯色，其中T1為紅色，T2為藍(lán)色。在探針A和探針B等摩爾濃度混合，且終濃度≤500nM時，帶有FAM標(biāo)記的探針發(fā)生酶切反應(yīng)，而帶有Dig標(biāo)記的探針未被酶切時，僅有檢測線T1為紅色，質(zhì)控線C為藍(lán)色；帶有Dig標(biāo)記的探針發(fā)生酶切反應(yīng)，而帶有FAM標(biāo)記的探針未被酶切時，僅有檢測線T2為藍(lán)色，質(zhì)控線C為紅色，從而達(dá)到互相矯正的目的。
JY0308不同檢測線和質(zhì)控線的顯色結(jié)果含義如下圖所示。
