瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)Flag標簽抗體專題
什么情況下會選擇標簽抗體用于免疫沉淀呢？
當某些目標蛋白沒有對應(yīng)的特異性抗體（eg.抗體所識別的抗原表位被相互作用蛋白所遮蔽，無法與目的蛋白相互作用或抗體選擇不合適，所選抗體不能識別處于天然構(gòu)象的蛋白）而無法進行免疫沉淀時，可以采用一個表位標記蛋白后，再選擇針對此表位的標簽抗體來進行免疫沉淀。
什么樣的標簽適合用于免疫沉淀呢？
Flag（DDDDK）標簽是一個與重組蛋白相融合的由 8個親水氨基酸（DYKDDDDK）組成的多肽片斷。Flag標簽只有8個氨基酸組成，因此它不會占據(jù)其他表位與結(jié)合域，避免導(dǎo)致融合蛋白的功能、分泌性以及轉(zhuǎn)運發(fā)生改變。由于它的親水性特點，Flag標簽傾向于定位在融合蛋白表面，因此更易與抗體結(jié)合以及被腸激酶酶解。
Flag標簽系統(tǒng)是已被公認的用于表達、純化以及檢測融合蛋白的表達系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于Western blotting、免疫細胞組化、免疫共沉淀、流式細胞術(shù)、蛋白純化以及蛋白相互作用、蛋白分離等多個研究領(lǐng)域。
為什么推薦使用Flag標簽抗體偶聯(lián)的瓊脂糖/磁珠？
與使用Protein A/G瓊脂糖的傳統(tǒng)免疫沉淀（IP）方法相比，Abmart的瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)標簽抗體，省去了Protein A/G與抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合的步驟。偶聯(lián)抗體直接和目標蛋白結(jié)合后，通過離心或使用磁力架，將目標蛋白從細胞裂解液中分離出來。不僅讓實驗變得簡單快捷，更可以避免非特異性結(jié)合，降低背景。表位標記蛋白的免疫沉淀可用于確定蛋白的細胞定位、研究翻譯后修飾或檢測標記蛋白與其它蛋白之間的相互作用。
§ 看到這里，您肯定會問，Protein A/G的缺點是什么？
1. 耗時：使用Protein A/G需要額外的孵育與洗滌操作
1. 效果差：當抗體種屬、亞型和ProteinA/G不匹配時，ProteinA/G和抗體結(jié)合能力弱
2. 背景高：和樣本中的其他免疫球蛋白結(jié)合，產(chǎn)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致高背景
與使用Protein A/G瓊脂糖的傳統(tǒng)免疫沉淀（IP）方法相比，Abmart的瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)標簽抗體，省去了Protein A/G與抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合的步驟。偶聯(lián)抗體直接和目標蛋白結(jié)合后，通過離心或使用磁力架，將目標蛋白從細胞裂解液中分離出來。不僅讓實驗變得簡單快捷，更可以避免非特異性結(jié)合，降低背景。表位標記蛋白的免疫沉淀可用于確定蛋白的細胞定位、研究翻譯后修飾或檢測標記蛋白與其它蛋白之間的相互作用。
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