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一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量檢測(cè)試劑盒 (微量法100T/96S)
| 貨號(hào) | SH0622 | 售價(jià)（元） | 792 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0622 |
一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量檢測(cè)試劑盒 (微量法100T/96S) |
100T/96S |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
NO（Nitric Oxide，NO）廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中，特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信息物質(zhì)，發(fā)揮信號(hào)傳遞的作用，是一種新型的生物信使分子，在機(jī)體的生理、病理過程中起著重要的作用。
測(cè)定原理：
NO在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成NO2—，在酸性條件下，NO2—與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物，進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合，產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰，測(cè)定其吸光值，可以計(jì)算NO含量。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0622-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
6ml |
4℃避光 |
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試劑二：液體 |
6ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：液體6ml×1瓶，4℃避光保存。(用之前60℃加熱震蕩15min)
自備儀器和用品：
天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
樣品處理：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。10000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心15min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 體液和培養(yǎng)液等其它液態(tài)樣品：直接測(cè)定。
測(cè)定步驟和操作表：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至550nm。
2、 操作表
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空白管 |
測(cè)定管 |
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樣品（μl） |
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100 |
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提取液（μl） |
100 |
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試劑一（μl） |
50 |
50 |
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試劑二（μl） |
50 |
50 |
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混勻，室溫靜置15min，于微量石英比色皿/96孔板，測(cè)定A550，ΔA=A測(cè)定-A空白 |
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NO含量計(jì)算：
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986
1、組織樣品：
（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算
NO含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×W）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算
NO含量（μmol/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣×Cpr）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷Cpr
2、細(xì)胞：
NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）
3、其他樣品：
NO含量（μmol/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷V樣
= 125×（ΔA +0.0103）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.1ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/ml
b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y= 0.008x - 0.0103，R2= 0. 9986
1、組織樣品：
（1）按樣本重量計(jì)算
NO含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣÷V樣總×W）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算
NO含量（μmol/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣×Cpr）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷ Cpr
2、細(xì)胞：
NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）
3、 其他樣品：
NO含量（μmol/L）=（ΔA +0.0103）÷0.008× V反總÷V樣= 250×（ΔA +0.0103）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.1ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/ml