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細(xì)胞色素b5檢測試劑盒（分光光度法 50T/48S）
| 貨號 | SH0609 | 售價（元） | 420 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0609 |
細(xì)胞色素b5檢測試劑盒（分光光度法 50T/48S） |
50T/48S |
測定意義：
胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶，在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用，尤其是藥物和毒物的代謝。細(xì)胞色素P450和細(xì)胞色素b5是P450酶系的兩個血紅素蛋白，其比值的變化與P450代謝活性密切相關(guān)。
測定原理：
氧化型細(xì)胞色素b5經(jīng)連二亞硫酸鈉還原后，在424nm處有最大吸收峰，通過測定424nm和490nm處吸光值的差異，即可計(jì)算出細(xì)胞色素b5的含量。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0609-50T/48S |
Storage |
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試劑一：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑二：液體 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加100ml蒸餾水，充分溶解。
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、普通離心機(jī)，超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1ml玻璃比色皿和蒸餾水。
工作液配制：
臨用前配制，戴一次性手套，小心打開試劑三瓶蓋，加試劑二50 ml充分溶解，4℃避光可保存1周。
樣品中細(xì)胞色素b5提?。?/span>
1、除去細(xì)胞核，線粒體等大分子物質(zhì)：稱約0.5g組織，加入1ml試劑一，冰上充分研磨，10 000g 4℃離心30min，取上清液，轉(zhuǎn)入超速離心管中。
2、粗制微粒體：100 000g，4℃離心60min，棄上清液。
3、除血紅蛋白等雜質(zhì)：向步驟2的沉淀中加1ml試劑一，蓋緊后充分震蕩溶解，100 000g離心30min，棄上清液。
4、待測液：向步驟3的沉淀中加試劑二0.5ml，蓋緊后充分震蕩溶解，即待測液，該待測液需當(dāng)天測定。
細(xì)胞色素b5含量測定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min。
2. 工作液置于25℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取1ml玻璃比色皿，加入50 μl蒸餾水，1000μl工作液，室溫靜置2 min，424nm和490nm處吸光值，424nm處吸光值記為A空白管1，490nm處吸光值記為A空白管2。△A空白管= A空白管1- A空白管2
4. 測定管：取1ml玻璃比色皿，加入50 μl待測液，1000μl工作液，室溫靜置2 min，424nm和490nm處吸光值，424nm處吸光值記為A測定管1，490nm處吸光值記為A測定管2。△A測定管= A測定管1- A測定管2。
注意：只需要做一個空白管。
樣品細(xì)胞色素b5含量計(jì)算公式：
(1).按照蛋白濃度計(jì)算:
細(xì)胞色素b5含量(nmol/mg prot)= (△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總÷（Cpr×V樣）
= 123×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr
(2).按照樣本質(zhì)量計(jì)算:
細(xì)胞色素b5含量（nmol/g 鮮重）= (△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×（V樣總÷V樣）÷W
= 61.4×(△A測定管-△A空白管)÷W
ε：還原型細(xì)胞色素b5納摩爾消光系數(shù)，171×10-6 L/nmol/cm；d：比色皿光徑（cm），1cm； V反總：反應(yīng)體系總體積，1.05 m L=0.00105 L；Cpr：待測液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測定；V樣：加入反應(yīng)體系中待測液體積，50 μl=0.05 ml；V樣總：待測液總體積，0.5 ml；W：樣品質(zhì)量，g。