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糜蛋白酶檢測試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號 | SH0594 | 售價（元） | 1440 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0594 |
糜蛋白酶（Chymotrypsin）檢測試劑盒（微量法 100T/96S） |
100T/96S |
測定意義：
糜蛋白酶，又稱胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一種蛋白水解酶，能迅速分解變性蛋白質(zhì)。糜蛋白酶的功能與胰蛋白酶相似，但是具有分解能力強、毒性低和不良反應(yīng)小等優(yōu)點。臨床上糜蛋白酶用于痰液稀化，對膿性和非膿性痰液均有效；也用于創(chuàng)傷或手術(shù)后傷口愈合，如白內(nèi)障摘除。
測定原理：
糜蛋白酶催化ATEE水解，產(chǎn)物在237 nm有特征光吸收；通過測定237 nm 光吸收增加速率，來計算糜蛋白酶活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0594-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入20 ml蒸餾水充分溶解。
自備儀器和用品：
臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。
測定步驟：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到237 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于37℃水浴中保溫30min。
3. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，加入20μl試劑一，200μl試劑二，混勻于237nm測定4min內(nèi)吸光值變化，記為△A空白管。（從吸光值穩(wěn)定增加開始計時）
4. 測定管：取微量石英比色皿/96孔板，加入20μl粗酶液，200μl試劑二，混勻于237nm測定4min內(nèi)吸光值變化，記為△A測定管。（從吸光值穩(wěn)定增加開始計時）
注意：空白管只需要測定一次。
糜蛋白酶活性計算公式：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃每毫克蛋白每分鐘催化吸光值增加1為一個酶活單位。
糜蛋白酶（U/mg prot）= (△A測定管－△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V1)÷T
=2.75×(△A測定管－△A空白管)÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：25℃每克樣品每分鐘催化吸光值增加1為一個酶活單位。
糜蛋白酶（U/g 鮮重）=(△A測定管－△A空白管) ×V反總÷(W×V1÷V2)÷T
=2.75×(△A測定管－△A空白管)÷W
W：樣品質(zhì)量（g）；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測定；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（ml），20μl=2×10-2 ml；V2：粗酶液總體積（ml），1 ml；V反總：反應(yīng)總體積，220μl=0.22ml； T：反應(yīng)時間（min），4min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃每毫克蛋白每分鐘催化吸光值增加1為一個酶活單位。
糜蛋白酶（U/mg prot）= (△A測定管－△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V1)÷T
=2.75×(△A測定管－△A空白管)÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：25℃每克樣品每分鐘催化吸光值增加1為一個酶活單位。
糜蛋白酶（U/g 鮮重）=(△A測定管－△A空白管) ×V反總÷(W×V1÷V2)÷T
=2.75×(△A測定管－△A空白管)÷W
W：樣品質(zhì)量（g）；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測定；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（ml），20μl=2×10-2 ml；V2：粗酶液總體積（ml），1 ml；V反總：反應(yīng)總體積，220μl=0.22ml； T：反應(yīng)時間（min），4min。
注意事項：
臨用前配制的試劑配置好后3天內(nèi)使用完畢。