當(dāng)前位置： 首頁(yè) - 產(chǎn)品目錄 - 生化試劑盒
單脫氫抗環(huán)血酸還原酶（MDHAR）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0560 | 售價(jià)（元） | 1896 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
|
貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
|
SH0560 |
單脫氫抗環(huán)血酸還原酶（MDHAR）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S） |
100T/96S |
測(cè)定意義：
MDHAR催化MDHA還原生成AsA，在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。
測(cè)定原理：
MDHAR 催化 NADH 還原MDHA 生成 AsA和NAD+，NADH在340 nm有特征吸收峰，但是NAD+沒(méi)有。通過(guò)測(cè)定340 nm光吸收下降速率，來(lái)計(jì)算出MDHAR活性。
組成：
|
產(chǎn)品名稱 |
SH0560-100T/96S |
Storage |
|
試劑一：液體 |
100ml |
4℃ |
|
試劑二：液體 |
20ml |
室溫 |
|
試劑三：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
|
試劑四：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
|
試劑五：液體 |
15μl |
4℃ |
|
說(shuō)明書(shū) |
一份 |
|
試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃保存。臨用前加入3 ml蒸餾水充分溶解。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入2.5 ml蒸餾水充分溶解。
試劑五：液體15μl×1瓶，4℃保存。臨用前加3 ml試劑二充分溶解。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和雙蒸水
粗酶液提取：
組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；8000g ，4℃離心20min，取上清液置冰上混勻待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
MDHAR測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min。
3.依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μl試劑三、20μl試劑四、20μl試劑五和120μl試劑二，最后加入20μl上清液，迅速混勻后于340nm比色，記錄30s和150s的吸光值30s和150s的吸光值A1和A2，△A=A1-A2。
MDHAR活性計(jì)算公式：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
MDHAR (nmol/min /mg prot) = △A÷ε÷d×V反總×109]÷（Cpr×V樣）÷T
= 804×△A ÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol NADH 為1U。
MDHAR (nmol/min /g 鮮重) = △A÷ε÷d×V反總×109]÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 804×△A ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
MDHAR (nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V反總×109÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T
= 804×△A ÷ 細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每毫升液體每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
MDHAR (nmol/min /ml) = △A÷ε÷d×V反總×109÷V樣）÷T
= 804×△A
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6220 L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml=2×10-4L；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μl=0.02ml；V樣總：提取液體積，1 ml；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml，蛋白質(zhì)濃度需要另外測(cè)定，建議使用本公司蛋白質(zhì)含量BCA試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；T：反應(yīng)時(shí)間，2min。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
MDHAR (nmol/min /mg prot) = △A÷ε÷d×V反總×109]÷（Cpr×V樣）÷T
= 1608×△A ÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol NADH 為1U。
MDHAR (nmol/min /g 鮮重) = △A÷ε÷d×V反總×109]÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 1608×△A ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
MDHAR (nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V反總×109÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T
= 1608×△A ÷ 細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每毫升液體每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
MDHAR (nmol/min /ml) = △A÷ε÷d×V反總×109÷V樣）÷T
=1608×△A
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6220 L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml=2×10-4L；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μl=0.02ml；V樣總：提取液體積，1 ml；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml，蛋白質(zhì)濃度需要另外測(cè)定，建議使用本公司蛋白質(zhì)含量BCA試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；T：反應(yīng)時(shí)間，2min。
注意事項(xiàng)：
臨用前配制的試劑未使用完的4℃保存，3天內(nèi)使用完。