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測(cè)定意義：

高鐵還原酶（ferric-chelate reductase, FCR）催化高價(jià)鐵螯合物中的Fe3+還原為Fe2+，在部分物種鐵元素的吸收中有重要作用。

測(cè)定原理：

FCR催化Fe³⁺還原為Fe²⁺，Fe²⁺和ferrozine反應(yīng)顯色，在562nm下有特征吸光值。

試劑組成和配制：

需自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

按照組織質(zhì)量（g）：水（ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml蒸餾水），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至562nm，蒸餾水調(diào)零。

2、工作液配制：將試劑一、二、三以1:1:1的比例混合。臨用前配制，用多少配多少。

在微量石英比色皿/96孔板中，加入50μl樣本上清和150μl工作液，混勻，記錄初始吸光值A1和30min后的吸光值A2。ΔA=A2-A1。

FCR活性計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 8.0014x + 0.0011，R2 = 0.9997；

按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個(gè)酶活力單位。

FCR（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0011）÷ 8.0014×1000×V標(biāo)÷(V樣÷V樣總×W)÷T = 4.166×（△A-0.0011）÷W

按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個(gè)酶活力單位。

FCR（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0011）÷8.0014×1000×V標(biāo)÷(V樣÷V樣總×Cpr)÷T=4.166×（△A-0.0011）÷Cpr

V樣總：加入提取液體積，1 ml；V樣：反應(yīng)中樣品體積，50μl；V標(biāo)：加入標(biāo)準(zhǔn)品體積 ，50μl；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；1000，μmol到nmol的轉(zhuǎn)換系數(shù)。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 4.0007x + 0.0011，R2 = 0.9997；y，吸光度

按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個(gè)酶活力單位。

FCR（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0011）÷4.0007×1000×V標(biāo)÷(V樣÷V樣總×W)÷T=8.331×（△A-0.0011）÷W

按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個(gè)酶活力單位。

FCR（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0011）÷4.0007×1000×V標(biāo)÷(V樣÷V樣總×W)÷T =8.331×（△A-0.0011）÷Cpr

V樣總：加入提取液體積，1 ml；V樣：反應(yīng)中樣品體積，50μl；V標(biāo)：加入標(biāo)準(zhǔn)品體積 ，50μl；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；1000，μmol到nmol的轉(zhuǎn)換系數(shù)。