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莽草酸脫氫酶（SD）檢測試劑盒（分光光度法 50T/48S）
| 貨號 | SH0415 | 售價（元） | 1140 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0415 |
莽草酸脫氫酶（SD）檢測試劑盒（分光光度法 50T/48S） |
50管/48樣 |
測定意義：
莽草酸途徑是存在于植物、真菌和微生物中的一條重要的代謝途徑，莽草酸脫氫酶是莽草酸合成途徑中的關(guān)鍵酶。
測定原理：
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產(chǎn)生NADPH，檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。
試劑組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0415-50T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
60ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
60ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
2瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1、 血清（漿）中NADP+和NADPH的提取
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
（1）在試劑二中加入25ml試劑一充分溶解混勻，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min，現(xiàn)配現(xiàn)用。
（2）取0.05ml樣本和0.95ml試劑二于1ml比色皿中，混勻，在340 nm波長下立即記錄20秒時的初始吸光度A1和5分20秒時的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。
SD活性計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD（nmol /min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V×樣Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘每分鐘產(chǎn)生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD（nmol /min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘每分鐘產(chǎn)生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD（nmol /min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=1.286×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。