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土壤亞硝酸還原酶(S-NiR)檢測試劑盒(微量法100T/48S)

貨號 SH0382 售價(元) 1200
規(guī)格 100T/48S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

SH0382

土壤亞硝酸還原酶(S-NiR)檢測試劑盒(微量法100T/48S)

100T/48S

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定                                             

測定意義:

土壤亞硝酸還原酶是反硝化作用中的關(guān)鍵酶之一,參與亞硝酸鹽至NO的還原反應(yīng),它的活性反映了生物降解過程中氮素的轉(zhuǎn)化效率,為氮素轉(zhuǎn)化規(guī)律的研究提供一定的依據(jù)

測定原理:

亞硝酸還原酶可將NO2還原為NO,使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO2減少,即540nm處吸光值的變化可反應(yīng)土壤中亞硝酸還原酶的活性。

試劑的組成和配制:

產(chǎn)品名稱

SH0382-100T/48S

Storage

試劑一:液體

4ml

4℃

試劑二:粉劑

1

4℃

試劑三:液體

4ml

4℃

試劑:液體

10ml

4℃避光

試劑五:液體

10ml

4℃避光

說明書

一份

試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加4ml蒸餾水溶解。

試劑三:液體4ml×1瓶,4℃保存。(如出現(xiàn)沉淀可以70-80℃加熱溶解)

試劑四:液體10ml×1瓶,4℃避光保存。(如出現(xiàn)沉淀可以70-80℃加熱溶解)

工作液:臨用前根據(jù)用量將試劑四和試劑五以1:1的比例混合。

自備儀器和用品:

天平、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、水浴鍋、低溫離心機。

樣品處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。

測定操作表:

 

空白管

對照管

測定管

風(fēng)干土樣(g

 

0.02

0.02

蒸餾水(μl

 

40

 

試劑一(μl

40

 

40

混勻后,25℃反應(yīng)1h

試劑三(μl

40

40

40

充分震蕩30S,10000rpm,4℃,離心10min

上清液(μl

70

70

70

工作液(μl

140

140

140

充分混勻,靜置3min后測定540nm處吸光值,分別記為A空白管、A對照管、A測定管??瞻坠苤灰鲆还?,每個測定管需設(shè)一個對照管。

計算公式

a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 1.5562x+ 0.0088,R2 = 0.996x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/ml),y為吸光值(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)。

酶活單位定義:每g土樣每天還原1μmol NO2ˉ 的量為一個酶活力單位。

S-NiRμmol /d /g土樣)=[A空白管-(A測定管-A對照管) -0.0088]÷1.5562×V標(biāo)÷W÷T

= 0.617×[A空白管-(A測定管-A對照管) -0.0088]÷W

T:反應(yīng)時間,1h=1/24d;V標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)液體積,0.04ml;W:樣本質(zhì)量,g

b. 使用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.7781x+ 0.0088,R2 = 0.996x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/ml),y為吸光值(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)。

酶活單位定義:每g土樣每天還原1μmol NO2ˉ 的量為一個酶活力單位。

S-NiRμmol /d /g土樣)=[A空白管-(A測定管-A對照管) -0.0088]÷0.7781×V標(biāo)÷W÷T

= 1.234×[A空白管-(A測定管-A對照管) -0.0088]÷W

T:反應(yīng)時間,1h=1/24d;V標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)液體積,0.04ml; W:樣本質(zhì)量,g。

注意事項:

1. 配制好的工作液3天內(nèi)使用完。

2. 若吸光值超過1.5,將上清液進行適當(dāng)?shù)南♂尯笤偌尤牍ぷ饕猴@色,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

3. 嚴(yán)格控制顯色時間,否則會對結(jié)果有影響。

4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為0.03μmol/ml-1.5μmol/ml。

5.  A空白管-A測定管-A對照管)線性范圍為0.02-1.5。

 

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