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土壤幾丁質(zhì)酶檢測(cè)試劑盒(微量法100T/48S)

貨號(hào) SH0370 售價(jià)(元) 1560
規(guī)格 100T/48S CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
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貨號(hào)

名稱

規(guī)格

SH0370

土壤幾丁質(zhì)酶檢測(cè)試劑盒(微量法100T/48S)

100T/48S

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官(例如烏賊的軟骨),以及真菌類的細(xì)胞壁中,而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解,具有抵御真菌侵染的作用,成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。

測(cè)定原理:

幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖,進(jìn)一步與對(duì)二甲氨基苯甲醛產(chǎn)生紅色化合物,在585nm處有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。

試劑組成和配制:

產(chǎn)品名稱

SH0370-100T/48S

Storage

試劑一:液體

10ml

4℃

試劑二:液體

4ml

4℃

試劑三:液體

65ml

4℃避光

說明書

一份

自備儀器和用品:

天平、水浴鍋、離心機(jī)、震蕩儀、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板,甲苯、蒸餾水

樣品處理:

新鮮土樣風(fēng)干,過30-50目篩。

測(cè)定操作表:

 

對(duì)照管

測(cè)定管

土樣(g

0.1

0.1

甲苯(μl

15

15

混勻,25℃靜置15min

蒸餾水(μl

100

 

試劑一(μl

 

100

混勻,37℃培養(yǎng)24h

蒸餾水(μl

200

200

4000rpm4℃,離心10min,取上清200μl于新的EP管中

試劑二(μl

20

20

混勻,沸水浴5min

試劑三(μl

600

600

混勻,37℃顯色20min,取200μl微量石英比色皿/96孔板中,蒸餾水調(diào)零,測(cè)定585nm處吸光值,記為A對(duì)照管和A測(cè)定管,ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。

計(jì)算公式

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=5.2714x-0.0007,R2=0.9989x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/ml),y為吸光值ΔA

酶活性定義:37℃條件下,每克土壤每天分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。

土壤幾丁質(zhì)酶活性(μg/d/g 土樣)=ΔA +0.0007÷5.2714×V反總÷W÷T×1000

= 598×ΔA +0.0007

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.315ml;W:樣本質(zhì)量,0.1g;T:反應(yīng)時(shí)間,1d;10001mg/ml=1000μg/ml

b. 96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=2.6357x-0.0007,R2=0.9989;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/ml),y為吸光值ΔA。

酶活性定義:37℃條件下,每克土壤每天分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。

土壤幾丁質(zhì)酶活性(μg/d/g 土樣)=ΔA +0.0007÷2.6357×V反總÷W÷T×1000

= 1195×ΔA +0.0007

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.315ml;W:樣本質(zhì)量,0.1gT:反應(yīng)時(shí)間,1d;10001mg/ml=1000μg/ml

注意事項(xiàng):

試劑一充分混勻后再使用。

 

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