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測(cè)定意義：

漆酶（Laccase）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍(lán)氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強(qiáng)的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測(cè)方面有非常廣泛的應(yīng)用。

測(cè)定原理：

漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS，測(cè)定ABTS自由基的增加速率，可計(jì)算得漆酶活性。

試劑組成和配制：

工作液：粉劑×2瓶，4℃避光保存，臨用前每瓶加25ml試劑一溶解。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 ml玻璃比色皿、震蕩儀。

樣品處理：

新鮮土樣風(fēng)干，過(guò)30-50目篩。

測(cè)定步驟：

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到420nm，蒸餾水調(diào)零。

37℃震蕩反應(yīng)10min，冰浴5min，10000g，4℃離心10min，取出800μl反應(yīng)液立即于420nm處測(cè)定吸光值，分別記為A1，A2。△A=A2-A1。

酶活性計(jì)算公式：

酶活性定義：每克土壤每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位（U）。

SL活性（nmol/min/g 土樣）= ×V反總÷W÷T= 2.78×△A÷W

ε：ABTS毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1ml； W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，10min

注意事項(xiàng):

1、工作液需臨用前配制，并且盡快使用，4℃保存一周，若變色則不能使用。

2、測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值較高，請(qǐng)將樣品用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

3、反應(yīng)完立即記錄數(shù)據(jù)，以免造成逆向反應(yīng)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。