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測(cè)定意義：

磷是植物必需大量元素。植物主要通過(guò)根系從土壤中獲取磷元素。土壤磷包括有機(jī)磷和無(wú)機(jī)磷。土壤有機(jī)磷經(jīng)過(guò)礦化分解而轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷，才能進(jìn)一步被植物吸收利用。

測(cè)定原理：

從土壤中提取無(wú)機(jī)磷，在酸性環(huán)境中，通過(guò)鉬藍(lán)法定磷，即可計(jì)算出無(wú)機(jī)磷含量。

試劑組成和配制：

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入8ml蒸餾水，充分溶解后加入4ml試劑二，混勻。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支，20μmol/L無(wú)機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式水浴鍋，分析天平、可調(diào)式移液器、蒸餾水和100目篩子。

土壤無(wú)機(jī)磷提取：

取10ml離心管，加入精確稱取的100目篩子過(guò)篩的風(fēng)干土樣約0.01g，加入1ml提取液，震蕩混勻，然后置于40℃水浴浸提1h，8000g，25℃，離心10min，取上清液，待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 打開(kāi)水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到40℃。

3. 空白管：取EP管，依次加入100μl蒸餾水，100μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，依次加入10μl標(biāo)準(zhǔn)液，90μl蒸餾水，100μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 測(cè)定管：取EP管，依次加入10μl上清液，90μl蒸餾水，100μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

需在40min內(nèi)完成比色。

土壤無(wú)機(jī)磷含量計(jì)算公式：

a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

S-PHOS（μmol /g 干重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V總÷W=0.02×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L；V總：總上清液體積，1 ml=0.001 L；W：土壤樣品質(zhì)量，g。

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

S-PHOS（μmol /g干重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V總÷W =0.02×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L；V總：總上清液體積，1 ml=0.001 L；W：土壤樣品質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1、 空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

2、試劑三需臨用前配制，限當(dāng)天使用。試劑三配制過(guò)程中，可能會(huì)產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果，注意吸取時(shí)不要將黑色固體吸入。

3、40min內(nèi)完成比色。