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正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義：

S-CAT是土壤微生物代謝的重要酶類，在H₂O₂清除系統(tǒng)中具有重要作用。

測(cè)定原理：

H₂O₂在240nm下有特征吸收峰，通過測(cè)定與土壤反應(yīng)后溶液在此波長(zhǎng)下吸光度的變化，即可反應(yīng)S-CAT活性的高低。

試劑組成和配制：

試劑一：液體100μl×5瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入9.9ml蒸餾水充分溶解后待用；用不完的試劑4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入2ml蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存（如出現(xiàn)結(jié)晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml石英比色皿和蒸餾水。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。

測(cè)定步驟：

25℃振蕩培養(yǎng) 20min

混勻8000g，25℃離心5min，取820μl上清

混勻，用蒸餾水調(diào)零，240nm處記錄各管A值。

注意事項(xiàng):

每個(gè)測(cè)定管要設(shè)一個(gè)無基質(zhì)管，無土管只要做一管。

S-CAT活性計(jì)算：

單位的定義：每天每g風(fēng)干土樣催化1μmol H₂O₂降解定義為一個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A無土管-A測(cè)定管+A無基質(zhì)管)×V反總÷（ε×d）×10⁶]÷W÷T=18.9×（A無土管-A測(cè)定管+A無基質(zhì)管）

V反總：反應(yīng)體系總體積，1.145×10^-3 L；ε：過氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； T：反應(yīng)時(shí)間，20 min=1/72d； W：樣本質(zhì)量，0.1g。