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蔗糖合成酶(分解方向;SS-Ⅰ)檢測試劑盒(分光光度法50T/24S)

貨號 SH0298 售價(元) 744
規(guī)格 50T/24S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

SH0298

蔗糖合成酶(分解方向;SS-Ⅰ)檢測試劑盒(分光光度法50T/24S)

50管/24樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義:

蔗糖是源(葉片等)光合產(chǎn)物向器官運輸?shù)闹饕螒B(tài)。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是雙向反應(yīng)酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性對于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意義。

測定原理:

SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游離果糖和UDPG,采用3,5-二硝基水楊酸法測定還原糖的含量來反映酶活性的高低。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0298-50T/24S

Storage

提取液:液體

60ml

4℃

試劑一:液體

10ml

4℃

試劑二:液體

5ml

4℃

試劑三:粉劑

2

-20

試劑液體

6ml

4℃

說明書

一份

試劑三:粉劑×2支,-20℃保存;臨用前每支加入1.2ml試劑二充分溶解待用,現(xiàn)配現(xiàn)用;

自備儀器和用品:

可見分光光度計、水浴鍋、離心機、移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰

樣品測定的準備

按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟:

1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至540nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測定,(在EP管中依次加入下列試劑):

試劑名稱(μl

測定管

對照管

樣本

20

20

試劑三

80

 

試劑一

 

80

混勻,30℃準確水浴30min后,95℃水浴10min,冷卻至室溫

試劑四

100

100

95℃水浴5min左右,冷卻至室溫

蒸餾水

800

800

混勻,540nm下測定各管吸光值。ΔA=A測定-A對照。每個測定管需

要設(shè)一個對照管。

SS-Ⅰ活性計算:

1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0012x - 0.0492;x為標準品濃度(μg/ml),yΔA

2、按照蛋白濃度計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)=[ (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(V×Cpr) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照樣本鮮重計算

單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g鮮重) =[(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(W× V÷V樣總) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.1ml V樣:加入樣本體積,0.02 ml;V樣總:加入提取液體積,1 mlT:反應(yīng)時間,30 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g。

 

 

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