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琥珀酸脫氫酶（SDH）檢測試劑盒（分光光度法50T/48S）
| 貨號 | SH0235 | 售價（元） | 336 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0235 |
琥珀酸脫氫酶（SDH）檢測試劑盒（分光光度法50T/48S） |
50管/48樣 |
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
SDH（EC 1.3.5.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。SDH是線粒體的一種標志酶，位于線粒體內(nèi)膜上的一種膜結(jié)合酶，是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外，為多種原核細胞產(chǎn)能的呼吸鏈提供電子。
測定原理：
SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸（PMS）傳遞還原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm處具有特征吸收峰，通過600nm吸光度的變化，測定2．6-DPIP的還原速度，代表SDH酶活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0235-50T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
50ml |
-20℃ |
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試劑二：液體 |
10ml |
-20℃ |
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試劑三：液體 |
1ml |
-20℃ |
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試劑四：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑五：粉劑 |
1支 |
4℃ |
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試劑六：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑五：粉劑×1支，4℃保存，臨用前加入2ml蒸餾水，用不完的試劑仍4℃保存；
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入2ml蒸餾水，用不完的試劑4℃保存。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、 稱取約0.1g組織或收集500萬細菌或細胞，加入1ml試劑一和10μl 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、 將勻漿600g，4℃離心5min。
3、 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
4、 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的SDH（此步可選做）。
在步驟④的沉淀中加入200μl試劑二和2μl 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），用于線粒體SDH活性測定。
測定步驟和加樣表：
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試劑名稱（μl） |
測定管 |
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試劑四 |
60 |
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試劑五 |
30 |
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蒸餾水 |
800 |
37℃(哺乳動物)或25℃（其它物種）保溫10min左右
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樣本 |
30 |
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試劑六 |
30 |
用蒸餾水調(diào)零后，依次加各試劑到1 ml玻璃比色皿中，在加入試劑六的同時開始計時，混勻，在600 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1和1分20秒時的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。
SDH活性的計算：
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=1508×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=304.6×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH活性（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.609×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，9.5×10-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.03 ml；V樣總：加入提取液體積，0.202 ml；T：反應(yīng)時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。