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谷氨酸合成酶(GOGAT)檢測(cè)試劑盒(分光光度50T/48S)

貨號(hào) SH0123 售價(jià)(元) 840
規(guī)格 50T/48S CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
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貨號(hào)

名稱

規(guī)格

SH0123

谷氨酸合成酶(GOGAT)檢測(cè)試劑盒(分光光度50T/48S)

50管/48樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

GOGAT分布于植物中,和谷氨酰胺合成酶共同構(gòu)成GS/GOGAT循環(huán),參與氨同化的調(diào)控。

測(cè)定原理:

GOGAT催化谷氨酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸,形成兩分子的谷氨酸;同時(shí)NADH氧化生成NAD+,340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0123-50T/48S

Storage

提取液:液體

60ml

4℃

試劑一:液體

60ml

4℃

試劑二:粉劑

2

4℃

說明書

一份

 

自備儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測(cè)定

1)工作液的配制:在試劑二中加入25ml試劑一充分溶解混勻,置于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴5min;現(xiàn)配現(xiàn)用(配好后3h內(nèi)用完);

20.1ml樣本和0.9ml工作液1ml比色皿中,混勻,加工作液的同時(shí)開始計(jì)時(shí),在340 nm波長(zhǎng)下記錄20秒時(shí)的初始吸光度A1520秒時(shí)的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

GOGAT活性計(jì)算:

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

GOGATnmol /min/mg prot[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

GOGATnmol /min /g 鮮重)[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總) ÷T=321×ΔA÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

GOGATnmol /min /104 cell[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V÷V樣總) ÷T=0.642×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 LεNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 ml;V樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。

 

 

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