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PfAgo Endonuclease PfAgo核酸內(nèi)切酶

貨號(hào) JY0316 售價(jià)(元) 詢價(jià)
規(guī)格 200ul CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡介
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產(chǎn)品簡介

PfAgo核酸內(nèi)切酶(PfAgo Endonuclease)來源于重組大腸桿菌,含有從激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)中克隆的Argonaute(Ago)核酸酶基因,是一種依托引導(dǎo)序列(guide DNA)與靶核酸堿基互補(bǔ)配對(duì),繼而特異識(shí)別并剪切靶核酸的核酸內(nèi)切酶。PfAgo 核酸內(nèi)切酶在5′磷酸化的guide DNA(大于15 nt)引導(dǎo)下精準(zhǔn)剪切單鏈DNA底物,剪切位點(diǎn)位于與引導(dǎo)序列互補(bǔ)的5′端開始的第10和第11個(gè)核苷酸之間,剪切不受靶標(biāo)序列和剪切位點(diǎn)相鄰序列限制。本產(chǎn)品于95℃ 1 小時(shí),酶活性不損失。

包裝量與儲(chǔ)存條件:

JY0316包裝量為JY0316-S和JY0316-L,各組分于-20℃及以下運(yùn)輸及保存,有效期為24 個(gè)月。長期保存建議放-80℃。

名稱

JY0316-S

JY0316-L

PfAgo?Endonuclease

200μL (200 U/μL)

400μL (200 U/μL)

10 ×?PfAgo?Endonuclease Reaction Buffer

0.5 mL

1 mL

?

使用方法:

1、?自備以下儀器、試劑及耗材,輔助完成后續(xù)PfAgo?Endonuclease切割反應(yīng)。

①儀器:PCR 儀器(ABI7500、 QuantStudio 5、Stepone plus)、金屬浴或水浴鍋;

②試劑:40 mM Mn2+( Nuclease-free H2O配制)、Nuclease-free H2O;

③合成引物:guide DNA:5′?P-TTTGGAGCTGGTGGCG 3′;

ss DNA:5′-6-FAM-CCTACGCCACCAGCTCCAACTACCACAA-BHQ1 3′?;

? ④耗材:Nuclease-free free EP 管。

2、按下表,配制反應(yīng)體系,并混合均勻。

名稱

體積

10 μM ssDNA

2μL

10 μM guide DNA

4μL

40 mM Mn2+

1μL

10 ×PfAgo?Endonuclease Reaction Buffer

2μL

PfAgo?Endonuclease (200 U/μL)

4μL

Nuclease-free H2O

up to 20μL

注:一般使用20 μL 體系,但也可以等比例放大;

? ? ? 試驗(yàn)前用Nuclease-free H2O將ssDNA 、guide DNA 稀釋至相應(yīng)濃度。

2、95℃孵育30 min。

3. 反應(yīng)產(chǎn)物可直接進(jìn)行核酸膠電泳分析。如果不立即電泳,可以加入EDTA 終止反應(yīng),并先凍存于-20℃。

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圖1.對(duì)照DNA的酶切結(jié)果? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?圖2 酶活檢測曲線圖

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