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10×HOLMES Buffer 1
| 貨號(hào) | 32005 | 售價(jià)（元） | 300 |
| 規(guī)格 | 5×1 mL | CAS號(hào) |
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產(chǎn)品簡介
10×HOLMES Buffer 1是適用于Cas12蛋白反式切割反應(yīng)的專用緩沖液。該反應(yīng)緩沖液的成分經(jīng)過優(yōu)化，可有效提升Cas12蛋白的反式切割活性，而不影響其檢測靶標(biāo)的特異性，因此，可被用于Cas12介導(dǎo)的CRISPR診斷反應(yīng)體系。常見的Cas12家族蛋白，如Cas12a（Cpf1）、Cas12b（C2c1）和Cas12f（Cas14）等，均可使用HOLMES Buffer 1作為反應(yīng)緩沖液。
實(shí)驗(yàn)流程
以LbCas12a反式剪切實(shí)驗(yàn)為例(20 μL反應(yīng)體系，需加入10×HOLMES Buffer 1的體積為2 μL)：
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組分 |
體積 |
終濃度 |
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10 × HOLMES Buffer 1 |
2 μL |
1 × |
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10 μM LbCas12a Nuclease |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM crRNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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1 μM Target DNA |
0.5~5 μL |
25~250 nM |
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10 μM ssDNA Reporter |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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Nuclease-free Water |
Up to 20 μL |
◆ 反式剪切體系中各組分的用量可以根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行調(diào)整，用量較少時(shí)可先將各組分稀釋后加入體系，LbCas12a Nuclease可用1×HOLMES Buffer 1稀釋，稀釋后需立即使用（若要稀釋后的Cas12酶長期保存，請(qǐng)使用Cas12 Dilution Buffer，#32012），crRNA、Target DNA及ssDNA Reporter可用Nuclease-free Water稀釋，但極低濃度的Target DNA（例如LOD實(shí)驗(yàn)）建議用0.1% Tween 20稀釋并使用低吸附的離心管、吸頭等耗材。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測熒光信號(hào)，37℃反應(yīng)，每30 sec采集一次熒光信號(hào)。
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組分 |
32005 |
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● 10×HOLMES Buffer 1 |
5×1 mL |
a.SpCas9 H840A Nickase濃度為10 μM，即10 pmol/μL，100 pmol規(guī)格的總體積為10 μL，1,000 pmol規(guī)格的總體積為100 μL；
保存條件
4℃儲(chǔ)存；常溫運(yùn)輸。