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D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素(鉀鹽 )

貨號 Y302 售價(元) 320
規(guī)格 10mg CAS號 115144-35-9
  • 產(chǎn)品簡介
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產(chǎn)品簡介

哺乳動物發(fā)光,一般是將螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase)基因整合到需觀察細(xì)胞的染色體DNA上,以表達(dá)熒光素酶,培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株,當(dāng)細(xì)胞分裂、轉(zhuǎn)移、分化時,熒光素酶也會得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)。標(biāo)記后的熒光素酶只有在活細(xì)胞內(nèi)才會產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象,并且發(fā)光強度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目呈線性相關(guān)。除螢火蟲熒光素酶外,有時也會用到海腎熒光素酶(renilla luciferase)。二者的底物不同,螢火蟲熒光素酶的底物是熒光素(D-luciferin,常見鉀鹽或者鈉鹽)。二者的發(fā)光波長也不一樣,前者發(fā)光波長在540-600 nm,后者發(fā)光波長在460-540nm。熒光素所發(fā)的光更容易透過組織,在體內(nèi)代謝較慢,而且特異性好。所以大部分活體成像實驗采用螢火蟲熒光素酶基因作為報告基因。

外觀:淡黃色粉末
溶解性:water 50mg/ml;
純度:>98%,實測大于99%
儲存條件:避光-20℃儲存

產(chǎn)品用途:D-Luciferin作為熒光素酶的底物,存在于多種發(fā)光生物體中。在ATP和熒光素酶的催化作用下,熒光素被氧化,產(chǎn)生藍(lán)綠色的光(560nm),當(dāng)?shù)孜镞^量時,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)。編碼熒光素酶的Luc基因是植物、細(xì)菌、哺乳動物細(xì)胞的常見報告基因。由于沒有背景干擾,因此可以很容易檢測出低至0.02 pg水平的熒光素酶。

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熒光素鉀鹽操作方法

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一:體外生物發(fā)光試驗熒光素試劑的制備
材料
—D-熒光素,鉀鹽D-luciferin,potassium salt?
—無菌純水
—完全培養(yǎng)基(自行配置)
步驟
1. 用無菌水制備200X熒光素原液(30mg/ml),輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。
2. 將D-luciferin,potassium salt?溶解于預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150 μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)。
3. 去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。
4. 圖像分析前,向細(xì)胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液,然后進行圖像分析。
—注射器濾膜過濾除菌,0.2 μ m
*提示:成像前在37℃下對細(xì)胞進行短時間孵育可增強信號。

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二:活體成像分析
材料
—D-熒光素,鉀鹽?D-luciferin,potassium salt?
—D-PBS,不含鈣、鎂(細(xì)胞培養(yǎng)級)
1:用無菌的DPBS(w/o Ca2+ ;Mg2+)配制D-熒光素鉀鹽工作液(15mg/ml),0.2μm濾膜過濾除菌。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存,避免反復(fù)凍融。一旦使用,放到4℃解凍,保持冰冷且避光。
2:注射量取決于注射方式,具體如下:

注射方式

劑量

靜脈注射(25-27gauge針頭)

按10μl/g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液

腹腔注射(25-27gauge針頭)

按10μl /g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液

肌肉注射(27gauge針頭)

50μl,濃度為1-2mg/ml熒光素工作液

鼻內(nèi)注射(pipette)

50μl,濃度為3mg/ml熒光素工作液

3: 注射入體內(nèi)10-20 min(待光信號達(dá)到最強穩(wěn)定平臺期),再進行成像分析。
注意:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,從而確定最高信號檢測時間和信號平臺期。保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲存液過濾除菌后,可以-20℃或-80℃分裝凍存,避免反復(fù)凍融。如果有條件,對儲存液充氮氣或氬氣(防止氧化),穩(wěn)定性和保存時間更長,長達(dá)1年。?注射方式,動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學(xué)曲線,確定最佳信號平臺期和最佳的檢測時間。熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒有差別,兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻(xiàn)來看,鉀鹽的使用率遠(yuǎn)高于鈉鹽,尤其是體內(nèi)實驗。兩者功效相同。 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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