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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

        由于磷酸化的化學(xué)計(jì)量比較低，因此磷酸肽的濃縮是成功進(jìn)行磷酸蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。
        PolyMAC 提供了一種有效的、大大改進(jìn)的方法來實(shí)現(xiàn)更完整的磷酸肽的富集化。這種高度選擇性 的富集法可以用于大多數(shù)復(fù)雜樣品，因?yàn)樗峁┝俗罴训膶傩院突厥章省?PolyMAC 是一種基于 聚合物的固定化金屬離子親和捕獲法，具有卓越的磷酸化蛋白質(zhì)組覆蓋率和回收率。它是一種可  溶性納米聚合物，設(shè)計(jì)用于與溶液中的磷肽相互作用，隨后在固相載體上捕獲，用于洗滌和磷肽  洗脫。與常用的二氧化鈦和固定化金屬離子親和捕捉法相比， PolyMAC 具有更好的重現(xiàn)性和磷酸 化肽段的富集性，磷酸化肽段的選擇性接近95%,回收率>90%。重要的是，對(duì)于總蛋白磷酸化水平較低的樣品， PolyMAC 具有非常好的回收率和選擇性。

產(chǎn)品組分及儲(chǔ)存條件

操作步驟

1. 向酶解和脫鹽后的干燥樣品中加入200 μL 的 Loading Buffer 充分重懸樣品。

2.將 PolyMAC   Beads 充分渦旋(10-20 s)后取50μL 于1.5 mL 的離心管中，瞬離2-3 s,然后去除上層儲(chǔ)存液。

3.將重懸后的樣品加入到含有 PolyMAC   Beads 的離心管中，然后置于混勻儀中，26℃,>1200   rpm, 劇烈搖晃25 min。

         4.將樣品加入 PolyMAC-Tips  中，先20× g 離 心 2 min, 然后100× g 離 心 1min, 確保樣品溶液從 Tips 尖端流出到離心管中。

        5.用200 μL Loading Buffer I 洗1次，先20g 離 心 2min, 然后100 g 離 心 1min, 棄濾液。 

        6.用200 μL Washing Buffer I 洗1次，先20g 離 心 2 min, 然后100g 離 心 1min, 棄濾液。 

       7.用200 μL Washing BufferII 洗1次，先20g 離 心 2 min, 然后100g 離 心 1min, 棄濾液。 

    8.將 Tips 放入新離心管中以收集洗脫的磷酸肽， Tips 中加入50 μL  Elution  Buffer,20g 離心2 min, 再加入50 μL Elution Buffer, 先 20g 離 心 2 min, 再以100 g 離心 1min, 收集濾液。

       9.如果有任何溶液殘留在吸頭中，請(qǐng)用移液器將其推出收集管中，凍干后-80 C 保存待質(zhì)譜檢測(cè)

案例展示

             圖 1 .PolyMAC  與磷酸酪氨酸富集(A,C和E）或在PH值為8的RPLC分段進(jìn)行總磷蛋白組識(shí)別（B,D和F）的性能

         我們描述了首次使用基于聚合物的金屬離子親和捕獲器(PolyMAC) 在 HER2 驅(qū)動(dòng)的乳腺癌轉(zhuǎn)基因小鼠模型上分析組織磷酸化蛋白質(zhì)組。

         通過將磷酸酪氨酸免疫沉淀與 PolyMAC 相結(jié)合，從5次 LC-MS/MS 運(yùn)行中鑒定了411個(gè)具有139個(gè)磷酸酪氨酸、45個(gè)磷酸絲氨酸和29個(gè)磷酸蘇氨酸位點(diǎn)的獨(dú)特多肽。將反相高效液相色譜  在pH8.0 條件下與 PolyMAC 聯(lián)用，從8個(gè) LC-MS/MS 運(yùn)行中鑒定了1571個(gè)獨(dú)特的多肽，其中  1279個(gè)是磷酸絲氨酸，213個(gè)是磷酸蘇氨酸，21個(gè)是磷酸酪氨酸。線性基序分析表明，許多亞磷 酸基序?qū)?yīng)于眾所周知的磷酸化基序。用藥物基因相互作用數(shù)據(jù)庫分析酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)組發(fā)  現(xiàn)了一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)以含有 FDA 批準(zhǔn)的或處于臨床開發(fā)中的抑制劑的 Src家族激酶為中心。這些結(jié)果表明， PolyMAC 非常適合于組織標(biāo)本的磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)分析。

注意事項(xiàng)及免責(zé)聲明

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。